Razvoj pouzdanih i standardiziranih metoda za testiranje osjetljivosti rojeva komaraca na insekticide ključan je za razumijevanje učinkovitosti novih aktivnih sastojaka ili formulacija. Metode za testiranje osjetljivosti rojeva komaraca na kontaktne insekticide ili proizvode (poput onih koji se promoviraju u programima javnog zdravstva) dobro su utvrđene i standardizirane. Međutim, metode ispitivanja hlapljivih ili aerosolnih insekticida koji se koriste u kućanskim proizvodima teško je učinkovito provesti. Na temelju preporuka Svjetske zdravstvene organizacije za kućanske insekticide, razvili smo standardiziranu i visokoučinkovitu metodu za testiranje aerosolnih proizvoda korištenjem komaraca u kavezima i učinkovitu metodu dezinfekcije provedenu u Peet-Grady ispitnoj komori (PG ispitna komora). Potvrdili smo učinkovitost ove nove metode korištenjem populacija komaraca Aedes i Anopheles otpornih na insekticide i osjetljivih na njih. Nova značajka ove metode je uključivanje komore usmjerene na kaveze komaraca, što omogućuje kvantitativnu procjenu stope ubijanja komaraca u stvarnom vremenu nakon izlaganja insekticidu. Dezinfekcija brisom učinkovito uklanja preostalo aerosolno ulje koje sadrži piretroid s površine ispitne komore, sa stopom smrtnosti manjom od 2% za osjetljive komarce testirane izravno na površini komore. U PG komori nije uočena prostorna heterogenost u stopama ubijanja ili smrtnosti među komarcima u kavezima. Naša metoda s dvostrukim kavezom pruža osam puta veći protok od metode slobodnog leta, što omogućuje istovremeno testiranje različitih sojeva komaraca i učinkovito razlikovanje između osjetljivih i otpornih populacija komaraca koje se testiraju paralelno.
Do danas su se aerosolni insekticidi prvenstveno koristili u kućanstvu za osobnu zaštitu, s ograničenom upotrebom u programima javnog zdravstva. Međutim, nedavne studije pokazale su široko rasprostranjenu upotrebu insekticida u kućanstvima u područjima gdje su česte bolesti koje prenose vektori. Bilo da je motivacija repelent protiv komaraca ili prevencija bolesti, postoji hitna potreba za standardiziranim i jednostavnim metodama za probir endemskih populacija komaraca na osjetljivost na kućne insekticide. To je ključno za predviđanje učinkovitosti insekticida protiv lokalnih vektora i razumijevanje kako upotreba insekticida u kućanstvima utječe na evolucijsku selekciju otpornosti na insekticide.
Dodatna metoda 1 pruža detaljne upute korak po korak za provođenje našeg programa testiranja aerosolnih insekticida.
Iako smjernice WHO-a preporučuju upotrebu automatskih nebulizatora, one ne daju specifične tehničke specifikacije. Upotreba automatskih nebulizatora je ključna, jer ručna nebulizacija u komori s propilen glikolom nije samo radno intenzivna, već može uzrokovati i prostorne nedosljednosti i varijacije u trajanju nebulizacije.
Reakcijska komora mora se sterilizirati nakon svakog testa, ali metoda unutarnjeg čišćenja preporučena u smjernicama WHO-a uključuje primjenu vode iz crijeva. U našem svakodnevnom radu ova metoda je najzahtjevniji korak u radu bioanalitičke opreme, stoga smo razvili i testirali postupak sterilizacije na bazi brisa.
Uklonjivi dijelovi ventilatora tretiraju se kako je gore opisano, a lopatice i okvir ventilatora čiste se spužvom natopljenom 5%-tnom otopinom Decona 90.
Na temelju odnosa između trajanja prskanja i brzine isporuke proizvoda, naš aerosolni raspršivač također je pokazao dobru točnost u kontroli omjera doze aerosola, barem u testiranom rasponu od 1 do 4 puta. Kao što je prikazano na slici 3b, ova karakteristika je posebno važna za karakterizaciju odnosa doze i odgovora novih formulacija aerosola ili određivanje identifikacijske doze za otkrivanje otpornosti na insekticid.
Pokazujemo da je naš revidirani protokol za procjenu kućnih aerosolnih insekticida, korištenjem dezinfekcije brisevima, dvostrukih kaveza, daljinski upravljanih raspršivača i biometrijskog snimanja akcijskim kamerama, učinkovitija i izvedivija alternativa trenutnim...WHOpreporuke. Metoda dezinfekcije brisom, koja zahtijeva samo 20 minuta, značajno štedi vrijeme u usporedbi s postojećim protokolom (koji obično zahtijeva jedan sat po ispitnoj komori). Također smanjuje vrijeme koje operateri provode noseći punu osobnu zaštitnu opremu (npr. respiratorne kacige i antistatičku radnu odjeću). Nadalje, ova metoda generira manje kontaminirane tekućine i odjeće za tretman nego potpuno čišćenje ispitne komore, čime se minimizira mogućnost kontaminacije prostorije u kojoj se nalazi ispitna komora. Metoda dezinfekcije brisom također je prikladna za dezinfekciju polutrajnih ispitnih prostorija koje zahtijevajuminimalnoraspored namještaja u različitim rasporedima soba.
Ključno pitanje istraženo u ovoj i drugim studijama je standardizacija doza izloženosti insekticidima primijenjenim u okolišu u različitim protokolima testiranja. Kao što je prikazano na slici 2b, unatoč fiksnom trajanju prskanja, volumen prskanja varirao je ovisno o vrsti aerosolnih limenki, što potencijalno odražava razlike u proizvodnim procesima (npr. unutarnji tlak, upotreba potisnog plina, struktura mlaznice itd.). Nadalje, trenutni nedostatak komercijalno dostupnih uređaja za daljinsko prskanje s potrebnom fleksibilnošću u trajanju prskanja ograničava njihovu upotrebu u procjeni odnosa doze i odgovora za suzbijanje komaraca. Ručno prskanje kroz ispitne otvore ili pristupne otvore (ako su dostupni) može dovesti do varijacija u dozama izloženosti. Zapravo, naši rezultati ističu potrebu i važnost smanjenja ovih izvora varijacija. Za rezistentne populacije Aedes aegypti uočili smo korelaciju između doze aerosola i konačnog određivanja osjetljivosti ili otpornosti (slika 3b). Idealno bi bilo da se doze aerosola standardiziraju u gramima aerosolizirane tvari, a ne u trajanju aerosolizacije, kako bi se olakšale usporedbe između različitih studija.
RCAD nudi alternativni pristup za buduća istraživanja koji minimizira utjecaj varijacija procesa. Iako smo otkrili da standardizacija aerosolnih sprejeva nije izvediva, pokazali smo da se masa aerosola isporučenog kroz različite aerosolne limenke može reproducibilno procijeniti kalibriranjem duljine prskanja (slike 2b, 3a). Takva standardizacija koncentracije aerosola u bilo kojoj ispitnoj komori ključna je za poboljšanje ponovljivosti rezultata.
Na temelju našeg iskustva i iskustva drugih istraživačkih skupina, preporuke sadržane u trenutnim Smjernicama u vezi s korištenjem metoda detekcije aerosola za testiranje komaraca koji slobodno lete predstavljaju značajne logističke izazove za laboratorijske i poluterenske studije. Na primjer, metode detekcije komaraca koji slobodno lete imaju vrlo nizak protok (uključujući radno intenzivno ponovno hvatanje preživjelih komaraca koji slobodno lete) i pate od niza tehničkih ograničenja, kao što su poteškoće u određivanju stope ubijanja u stvarnom vremenu.
Iako se naš validirani eksperiment s dvostrukim kavezom bavi problemom ograničenja protoka i predstavlja izvedivu metodu za probir osjetljivosti komaraca na aerosolne insekticide, treba napomenuti da su stope smrtnosti komaraca s Kajmanskih otoka bile značajno niže u eksperimentu s kavezom nego u eksperimentu slobodnog leta (slika 5c, tablica 1). Ova razlika može odražavati smanjenje doze insekticida unutar kaveza, jer manje kapljica aerosola prodire kroz mrežu i ulazi u kavez. Buća istraživanja mogla bi koristiti tkanine s većim mrežama i dizajne kaveza s većim brzinama protoka zraka ventilatora (npr. cilindrični dizajni) kako bi se dodatno potvrdili rezultati dobiveni različitim eksperimentalnim metodama.
Vrijeme objave: 02.02.2026.