U prethodnom projektu testiranja lokalnih pogona za preradu hrane na komarce u Tajlandu, utvrđeno je da eterična ulja (EO) Cyperus rotundus, galangala i cimeta imaju dobro djelovanje protiv komaraca protiv Aedes aegypti. U pokušaju smanjenja upotrebe tradicionalnihinsekticidii poboljšati kontrolu populacija otpornih komaraca, cilj ove studije bio je identificirati potencijalni sinergizam između adulticidnih učinaka etilen oksida i toksičnosti permetrina za komarce vrste Aedes aegypti, uključujući sojeve otporne na piretroide i osjetljive sojeve.
Procijeniti kemijski sastav i aktivnost ubijanja EO ekstrahiranog iz rizoma C. rotundus i A. galanga te kore C. verum protiv osjetljivog soja Muang Chiang Mai (MCM-S) i rezistentnog soja Pang Mai Dang (PMD-R). ) Aktivni odrasli Ae. Aedes aegypti. Biološki test smjese EO i permetrina na odraslim komarcima također je proveden na ovim sojevima Aedes kako bi se razumjela njegova sinergistička aktivnost.
Kemijska karakterizacija GC-MS analitičkom metodom pokazala je da je iz EO C. rotundus, A. galanga i C. verum identificirano 48 spojeva, što čini 80,22%, 86,75% i 97,24% ukupnih komponenti. Ciperen (14,04%), β-bisabolen (18,27%) i cinamaldehid (64,66%) glavne su komponente ulja ciperusa, ulja galangala i balzamičnog ulja. U biološkim testovima usmrćivanja odraslih jedinki, EO C. rotundus, A. galanga i C. verum bili su učinkoviti u ubijanju Ae. aegypti, vrijednosti LD50 MCM-S i PMD-R bile su 10,05 i 9,57 μg/mg ženki, 7,97 i 7,94 μg/mg ženki te 3,30 i 3,22 μg/mg ženki. Učinkovitost MCM-S i PMD-R Ae u ubijanju odraslih jedinki *aegypti* u ovim EO bila je bliska piperonil butoksidu (PBO vrijednosti, LD50 = 6,30 i 4,79 μg/mg ženki), ali ne toliko izražena kao permetrin (LD50 vrijednosti = 0,44 i 3,70 ng/mg ženki). Međutim, kombinirani biološki testovi pronašli su sinergiju između EO i permetrina. Značajan sinergizam s permetrinom protiv dva soja komaraca *Aedes*. *Aedes aegypti* uočen je u EM-u *C. rotundus* i *A. galanga*. Dodatak ulja *C. rotundus* i *A. galanga* značajno je smanjio LD50 vrijednosti permetrina na MCM-S s 0,44 na 0,07 ng/mg i 0,11 ng/mg kod ženki, s vrijednostima omjera sinergije (SR) od 6,28 i 4,00. Osim toga, EO C. rotundus i A. galanga također su značajno smanjili LD50 vrijednosti permetrina na PMD-R s 3,70 na 0,42 ng/mg i 0,003 ng/mg kod ženki, s vrijednostima SR od 8,81 odnosno 1233,33.
Sinergijski učinak kombinacije EO i permetrina za povećanje toksičnosti za odrasle komarce protiv dva soja komaraca Aedes. Aedes aegypti pokazuje obećavajuću ulogu etilen oksida kao sinergista u poboljšanju učinkovitosti protiv komaraca, posebno tamo gdje su tradicionalni spojevi neučinkoviti ili neprikladni.
Komarac Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) glavni je vektor dengue groznice i drugih zaraznih virusnih bolesti poput žute groznice, čikungunje i virusa Zika, što predstavlja ogromnu i trajnu prijetnju ljudima [1, 2]. Virus dengue najozbiljnija je patogena hemoragijska groznica koja pogađa ljude, s procijenjenih 5-100 milijuna slučajeva godišnje i više od 2,5 milijardi ljudi diljem svijeta u riziku [3]. Izbijanja ove zarazne bolesti predstavljaju ogroman teret za stanovništvo, zdravstvene sustave i gospodarstva većine tropskih zemalja [1]. Prema tajlandskom Ministarstvu zdravstva, u 2015. godini zabilježeno je 142 925 slučajeva dengue groznice i 141 smrtni slučaj u cijeloj zemlji, što je više od tri puta više slučajeva i smrtnih slučajeva u 2014. godini [4]. Unatoč povijesnim dokazima, dengue groznicu je iskorijenio ili uvelike smanjio komarac Aedes. Nakon suzbijanja Aedes aegypti [5], stope zaraze dramatično su porasle i bolest se proširila svijetom, dijelom zbog desetljeća globalnog zatopljenja. Eliminacija i suzbijanje Ae. Aedes aegypti relativno je teško jer je riječ o domaćem komarcu vektoru koji se pari, hrani, odmara i polaže jaja u i oko ljudskih nastambi tijekom dana. Osim toga, ovaj komarac ima sposobnost prilagodbe promjenama u okolišu ili poremećajima uzrokovanim prirodnim događajima (poput suše) ili ljudskim mjerama suzbijanja te se može vratiti na svoj izvorni broj [6, 7]. Budući da su cjepiva protiv dengue groznice tek nedavno odobrena i ne postoji specifičan tretman za dengue groznicu, sprječavanje i smanjenje rizika od prijenosa dengue groznice u potpunosti ovisi o suzbijanju komaraca vektora i uklanjanju ljudskog kontakta s vektorima.
Posebno, upotreba kemikalija za suzbijanje komaraca sada igra važnu ulogu u javnom zdravstvu kao važna komponenta sveobuhvatnog integriranog upravljanja vektorima. Najpopularnije kemijske metode uključuju upotrebu niskotoksičnih insekticida koji djeluju protiv ličinki komaraca (larvicidi) i odraslih komaraca (adidocidi). Suzbijanje ličinki smanjenjem izvora i redovitom upotrebom kemijskih larvicida poput organofosfata i regulatora rasta insekata smatra se važnim. Međutim, štetni utjecaji na okoliš povezani sa sintetičkim pesticidima i njihovim radno intenzivnim i složenim održavanjem ostaju glavna briga [8, 9]. Tradicionalna aktivna kontrola vektora, poput kontrole odraslih, ostaje najučinkovitije sredstvo kontrole tijekom virusnih epidemija jer može brzo i u velikim razmjerima iskorijeniti vektore zaraznih bolesti, kao i smanjiti životni vijek i dugovječnost lokalnih populacija vektora [3]. , 10]. Četiri klase kemijskih insekticida: organoklorini (nazivaju se samo DDT), organofosfati, karbamati i piretroidi čine osnovu programa kontrole vektora, pri čemu se piretroidi smatraju najuspješnijom klasom. Vrlo su učinkoviti protiv raznih člankonožaca i imaju nisku učinkovitost. toksičnost za sisavce. Trenutno, sintetski piretroidi čine većinu komercijalnih pesticida, čineći oko 25% globalnog tržišta pesticida [11, 12]. Permetrin i deltametrin su piretroidni insekticidi širokog spektra koji se desetljećima koriste diljem svijeta za suzbijanje raznih štetnika od poljoprivrednog i medicinskog značaja [13, 14]. U 1950-ima, DDT je odabran kao kemikalija izbora za tajlandski nacionalni program suzbijanja komaraca u javnom zdravstvu. Nakon široko rasprostranjene upotrebe DDT-a u područjima endemskim za malariju, Tajland je postupno ukinuo upotrebu DDT-a između 1995. i 2000. godine i zamijenio ga s dva piretroida: permetrinom i deltametrinom [15, 16]. Ovi piretroidni insekticidi uvedeni su početkom 1990-ih za suzbijanje malarije i denga groznice, prvenstveno tretmanima mrežama za spavanje i upotrebom termalne magle i sprejeva ultra niske toksičnosti [14, 17]. Međutim, izgubili su na učinkovitosti zbog snažne otpornosti komaraca i nedostatka javne usklađenosti zbog zabrinutosti za javno zdravlje i utjecaj sintetičkih kemikalija na okoliš. To predstavlja značajne izazove za uspjeh programa suzbijanja vektora prijetnji [14, 18, 19]. Da bi strategija bila učinkovitija, potrebne su pravovremene i odgovarajuće protumjere. Preporučeni postupci upravljanja uključuju zamjenu prirodnih tvari, rotaciju kemikalija različitih klasa, dodavanje sinergista i miješanje kemikalija ili istovremenu primjenu kemikalija različitih klasa [14, 20, 21]. Stoga postoji hitna potreba za pronalaženjem i razvojem ekološki prihvatljive, prikladne i učinkovite alternative i sinergista, a ova studija ima za cilj odgovoriti na tu potrebu.
Insekticidi prirodnog podrijetla, posebno oni na bazi biljnih komponenti, pokazali su potencijal u evaluaciji trenutnih i budućih alternativa suzbijanju komaraca [22, 23, 24]. Nekoliko studija pokazalo je da je moguće kontrolirati važne vektore komaraca korištenjem biljnih proizvoda, posebno eteričnih ulja (EO), kao sredstava za ubijanje odraslih komaraca. Adulticidna svojstva protiv nekih važnih vrsta komaraca pronađena su u mnogim biljnim uljima kao što su celer, kumin, zedoarija, anis, lubadara, timijan, Schinus terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis, Eucalyptus citriodora, Cananga odorata i Petroselinum Criscum [25,26,27,28,29,30]. Etilen oksid se sada koristi ne samo samostalno, već i u kombinaciji s ekstrahiranim biljnim tvarima ili postojećim sintetičkim pesticidima, proizvodeći različite stupnjeve toksičnosti. Kombinacije tradicionalnih insekticida poput organofosfata, karbamata i piretroida s etilen oksidom/biljnim ekstraktima djeluju sinergistički ili antagonistički u svojim toksičnim učincima te su se pokazale učinkovitima protiv vektora bolesti i štetnika [31,32,33,34,35]. Međutim, većina studija o sinergijskim toksičnim učincima kombinacija fitokemikalija sa ili bez sintetičkih kemikalija provedena je na poljoprivrednim vektorima kukaca i štetnicima, a ne na medicinski važnim komarcima. Štoviše, većina radova o sinergijskim učincima kombinacija biljnih i sintetičkih insekticida protiv vektora komaraca usredotočena je na larvicidni učinak.
U prethodnoj studiji koju su autori proveli kao dio tekućeg istraživačkog projekta probira intimicida s autohtonih prehrambenih biljaka u Tajlandu, utvrđeno je da etilen oksidi iz Cyperus rotundus, galangala i cimeta imaju potencijalnu aktivnost protiv odraslih Aedes. Egipat [36]. Stoga je cilj ove studije bio procijeniti učinkovitost EO izoliranih iz ovih ljekovitih biljaka protiv komaraca Aedes. aegypti, uključujući sojeve otporne i osjetljive na piretroide. Sinergijski učinak binarnih smjesa etilen oksida i sintetskih piretroida s dobrom učinkovitošću kod odraslih također je analiziran kako bi se smanjila upotreba tradicionalnih insekticida i povećala otpornost na vektore komaraca, posebno protiv Aedes. Aedes aegypti. Ovaj članak izvještava o kemijskoj karakterizaciji učinkovitih eteričnih ulja i njihovom potencijalu da povećaju toksičnost sintetičkog permetrina protiv komaraca Aedes. aegypti u sojevima osjetljivim na piretroide (MCM-S) i rezistentnim sojevima (PMD-R).
Rizomi C. rotundus i A. galanga te kora C. verum (slika 1) korišteni za ekstrakciju eteričnog ulja kupljeni su od dobavljača biljnih lijekova u provinciji Chiang Mai, Tajland. Znanstvena identifikacija ovih biljaka postignuta je konzultacijama s g. Jamesom Franklinom Maxwellom, herbarijskim botaničarom, Odsjek za biologiju, Fakultet znanosti, Sveučilište Chiang Mai (CMU), provincija Chiang Mai, Tajland, i znanstvenikom Wannari Charoensap; u Odjelu za farmaciju, Farmaceutskog fakulteta, Sveučilišta Carnegie Mellon, gđa Voucher, uzorci svake biljke pohranjeni su u Odjelu za parazitologiju Medicinskog fakulteta Sveučilišta Carnegie Mellon za buduću upotrebu.
Uzorci biljaka sušeni su pojedinačno u sjeni 3-5 dana na otvorenom prostoru s aktivnom ventilacijom i sobnom temperaturom od približno 30 ± 5 °C kako bi se uklonio sadržaj vlage prije ekstrakcije prirodnih eteričnih ulja (EO). Ukupno 250 g svakog suhog biljnog materijala mehanički je samljeveno u grubi prah i korišteno za izolaciju eteričnih ulja (EO) parnom destilacijom. Aparatura za destilaciju sastojala se od električnog grijača, tikvice s okruglim dnom od 3000 mL, ekstrakcijske kolone, kondenzatora i uređaja Cool ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokio, Japan). U tikvicu dodajte 1600 ml destilirane vode i 10-15 staklenih kuglica, a zatim je zagrijavajte na približno 100 °C pomoću električnog grijača najmanje 3 sata dok destilacija ne završi i dok se više ne proizvodi EO. EO sloj je odvojen od vodene faze pomoću lijevka za odvajanje, osušen iznad bezvodnog natrijevog sulfata (Na2SO4) i pohranjen u zatvorenoj smeđoj boci na 4°C dok se ne ispita kemijski sastav i aktivnost odraslih jedinki.
Kemijski sastav eteričnih ulja proveden je istovremeno s biološkim testom za odraslu tvar. Kvalitativna analiza provedena je korištenjem GC-MS sustava koji se sastoji od plinskog kromatografa Hewlett-Packard (Wilmington, CA, SAD) 7890A opremljenog jednim kvadrupolnim detektorom za selektivnu masu (Agilent Technologies, Wilmington, CA, SAD) i MSD 5975C (EI) (Agilent Technologies).
Kromatografska kolona – DB-5MS (30 m × unutarnji promjer 0,25 mm × debljina filma 0,25 µm). Ukupno vrijeme rada GC-MS-a bilo je 20 minuta. Uvjeti analize su da su temperature injektora i prijenosne linije 250 i 280 °C; temperatura peći je postavljena da se povećava s 50 °C na 250 °C brzinom od 10 °C/min, plin nosač je helij; brzina protoka 1,0 ml/min; volumen ubrizgavanja je 0,2 µL (1/10% volumena u CH2Cl2, omjer podjele 100:1); Za GC-MS detekciju koristi se sustav ionizacije elektrona s energijom ionizacije od 70 eV. Raspon akvizicije je 50–550 atomskih masenih jedinica (amu), a brzina skeniranja je 2,91 skeniranja u sekundi. Relativni postoci komponenti izraženi su kao postoci normalizirani površinom vrha. Identifikacija EO sastojaka temelji se na njihovom indeksu zadržavanja (RI). RI je izračunat pomoću jednadžbe Van den Doola i Kratza [37] za seriju n-alkana (C8-C40) i uspoređen s indeksima zadržavanja iz literature [38] i knjižničnih baza podataka (NIST 2008 i Wiley 8NO8). Identitet prikazanih spojeva, poput strukture i molekularne formule, potvrđen je usporedbom s dostupnim autentičnim uzorcima.
Analitički standardi za sintetski permetrin i piperonil butoksid (PBO, pozitivna kontrola u sinergijskim studijama) kupljeni su od tvrtke Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD). Kompleti za testiranje odraslih Svjetske zdravstvene organizacije (WHO) i dijagnostičke doze papira impregniranog permetrinom (0,75%) komercijalno su kupljeni od Centra za kontrolu vektora WHO u Penangu u Maleziji. Sve ostale korištene kemikalije i reagensi bili su analitičke čistoće i kupljeni su od lokalnih institucija u pokrajini Chiang Mai u Tajlandu.
Komarci korišteni kao testni organizmi u biološkom testu za odrasle bili su slobodno pareći laboratorijski komarci vrste Aedes aegypti, uključujući osjetljivi soj Muang Chiang Mai (MCM-S) i rezistentni soj Pang Mai Dang (PMD-R). Soj MCM-S dobiven je iz lokalnih uzoraka prikupljenih na području Muang Chiang Mai, provincija Chiang Mai, Tajland, i čuva se u entomološkoj sobi Odjela za parazitologiju Medicinskog fakulteta CMU od 1995. [39]. Soj PMD-R, za koji je utvrđeno da je otporan na permetrin, izoliran je iz poljskih komaraca izvorno prikupljenih iz Ban Pang Mai Danga, okrug Mae Tang, provincija Chiang Mai, Tajland, i čuva se u istom institutu od 1997. [40]. Sojevi PMD-R uzgajani su pod selektivnim tlakom kako bi se održala razina otpornosti povremenim izlaganjem 0,75% permetrinu pomoću WHO kompleta za detekciju s nekim modifikacijama [41]. Svaki soj Ae. Aedes aegypti koloniziran je pojedinačno u laboratoriju bez patogena na temperaturi od 25 ± 2 °C i relativnoj vlažnosti zraka od 80 ± 10% te fotoperiodu svjetlo/tama od 14:10 sati. Otprilike 200 ličinki držano je u plastičnim posudama (duljine 33 cm, širine 28 cm i visine 9 cm) napunjenim vodom iz slavine u gustoći od 150 do 200 ličinki po posudi i hranjene dva puta dnevno steriliziranim psećim keksima. Odrasle gliste držane su u vlažnim kavezima i kontinuirano hranjene 10%-tnom vodenom otopinom saharoze i 10%-tnom otopinom multivitaminskog sirupa. Ženke komaraca redovito sišu krv kako bi položile jaja. Ženke stare od dva do pet dana koje nisu hranjene krvlju mogu se kontinuirano koristiti u eksperimentalnim biološkim testovima na odraslim jedinkama.
Biološki test odnosa doze i smrtnosti EO proveden je na odraslim ženkama komaraca Aedes. aegypti, MCM-S i PMD-R korištenjem lokalne metode modificirane prema standardnom protokolu WHO-a za testiranje osjetljivosti [42]. EO iz svake biljke serijski je razrijeđen prikladnim otapalom (npr. etanolom ili acetonom) kako bi se dobila postupna serija od 4-6 koncentracija. Nakon anestezije ugljikovim dioksidom (CO2), komarci su pojedinačno vagani. Anestezirani komarci su zatim nepomično držani na suhom filter papiru na prilagođenoj hladnoj ploči pod stereomikroskopom kako bi se spriječila reaktivacija tijekom postupka. Za svaki tretman, 0,1 μl otopine EO naneseno je na gornji pronotum ženki pomoću ručnog mikrodozatora Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, SAD). Dvadeset pet ženki tretirano je svakom koncentracijom, s mortalitetom u rasponu od 10% do 95% za najmanje 4 različite koncentracije. Komarci tretirani otapalom služili su kao kontrola. Kako bi se spriječila kontaminacija testnih uzoraka, filter papir zamijenite novim filter papirom za svaki testirani EO. Doze korištene u ovim biološkim testovima izražene su u mikrogramima EO po miligramu tjelesne težine žive ženke. Aktivnost odraslih PBO također je procijenjena na sličan način kao i EO, s PBO korištenim kao pozitivna kontrola u sinergijskim eksperimentima. Tretirani komarci u svim skupinama stavljeni su u plastične čaše i dobili su 10% saharoze plus 10% multivitaminskog sirupa. Svi biološki testovi provedeni su na 25 ± 2 °C i 80 ± 10% relativne vlažnosti te ponovljeni četiri puta s kontrolama. Mortalitet tijekom 24-satnog razdoblja uzgoja provjeren je i potvrđen nedostatkom odgovora komaraca na mehaničku stimulaciju, a zatim zabilježen na temelju prosjeka četiri ponavljanja. Eksperimentalni tretmani ponovljeni su četiri puta za svaki testni uzorak koristeći različite serije komaraca. Rezultati su sažeti i korišteni za izračun postotka stope mortaliteta, koji je korišten za određivanje 24-satne smrtonosne doze probit analizom.
Sinergijski anticidni učinak EO i permetrina procijenjen je postupkom lokalnog ispitivanja toksičnosti [42] kako je prethodno opisano. Za pripremu permetrina u željenoj koncentraciji korišten je aceton ili etanol kao otapalo, kao i binarna smjesa EO i permetrina (EO-permetrin: permetrin pomiješan s EO u koncentraciji LD25). Testni kompleti (permetrin i EO-permetrin) procijenjeni su u odnosu na MCM-S i PMD-R sojeve Ae. Aedes aegypti. Svakoj od 25 ženki komaraca dane su četiri doze permetrina kako bi se testirala njegova učinkovitost u ubijanju odraslih jedinki, a svaki tretman ponovljen je četiri puta. Kako bi se identificirali kandidati za sinergiste EO, svakoj od 25 ženki komaraca dane su 4 do 6 doza EO-permetrina, a svaka primjena ponovljena je četiri puta. Tretman PBO-permetrinom (permetrin pomiješan s koncentracijom PBO u LD25) također je poslužio kao pozitivna kontrola. Doze korištene u ovim biološkim testovima izražene su u nanogramima testnog uzorka po miligramu tjelesne težine žive ženke. Četiri eksperimentalne procjene za svaki soj komaraca provedene su na pojedinačno uzgojenim serijama, a podaci o smrtnosti združeni su i analizirani pomoću Probita kako bi se odredila 24-satna smrtonosna doza.
Stopa smrtnosti prilagođena je Abbottovom formulom [43]. Prilagođeni podaci analizirani su Probit regresijskom analizom korištenjem programa za računalnu statistiku SPSS (verzija 19.0). Letalne vrijednosti od 25%, 50%, 90%, 95% i 99% (LD25, LD50, LD90, LD95 i LD99) izračunate su korištenjem odgovarajućih 95% intervala pouzdanosti (95% CI). Mjerenja značajnosti i razlike između ispitivanih uzoraka procijenjene su hi-kvadrat testom ili Mann-Whitneyjevim U testom unutar svakog biološkog testa. Rezultati su smatrani statistički značajnima pri P< 0,05. Koeficijent otpora (RR) procjenjuje se na razini LD50 pomoću sljedeće formule [12]:
RR > 1 označava otpornost, a RR ≤ 1 označava osjetljivost. Vrijednost omjera sinergije (SR) svakog kandidata za sinergist izračunava se na sljedeći način [34, 35, 44]:
Ovaj faktor dijeli rezultate u tri kategorije: vrijednost SR od 1±0,05 smatra se da nema vidljiv učinak, vrijednost SR >1,05 smatra se da ima sinergijski učinak, a vrijednost SR od Svijetložuto tekuće ulje može se dobiti parnom destilacijom rizoma C. rotundus i A. galanga te kore C. verum. Prinosi izračunati na suhu težinu bili su 0,15%, 0,27% (w/w) i 0,54% (v/v) w) respektivno (Tablica 1). GC-MS studija kemijskog sastava ulja C. rotundus, A. galanga i C. verum pokazala je prisutnost 19, 17 i 21 spoja, što je činilo 80,22, 86,75 i 97,24% svih komponenti (Tablica 2). Spojevi ulja rizoma C. lucidum uglavnom se sastoje od ciperonena (14,04%), zatim karalena (9,57%), α-kapselana (7,97%) i α-kapselana (7,53%). Glavna kemijska komponenta ulja rizoma galangala je β-bisabolen (18,27%), zatim α-bergamotena (16,28%), 1,8-cineola (10,17%) i piperonola (10,09%). Dok je cinamaldehid (64,66%) identificiran kao glavna komponenta ulja kore C. verum, cinamični acetat (6,61%), α-kopan (5,83%) i 3-fenilpropionaldehid (4,09%) smatrani su manjim sastojcima. Kemijske strukture cipernena, β-bisabolena i cinamaldehida glavni su spojevi C. rotundus, A. galanga i C. verum, kao što je prikazano na slici 2.
Rezultati triju OO-a koji su procijenili aktivnost odraslih jedinki protiv komaraca vrste Aedes. Komaraci vrste Aedes aegypti prikazani su u Tablici 3. Utvrđeno je da svi EO imaju smrtonosne učinke na komarce vrste MCM-S Aedes pri različitim vrstama i dozama. Aedes aegypti. Najučinkovitiji EO je C. verum, a slijede A. galanga i C. rotundus s LD50 vrijednostima od 3,30, 7,97 i 10,05 μg/mg za ženke MCM-S, što je nešto više od 3,22 (U = 1), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) i 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg PMD-R kod žena. To odgovara nešto većem učinku PBO na PMD-R u odraslih jedinki nego soj MSM-S, s vrijednostima LD50 od 4,79 odnosno 6,30 μg/mg ženki (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057). Može se izračunati da su vrijednosti LD50 za C. verum, A. galanga, C. rotundus i PBO protiv PMD-R približno 0,98, 0,99, 0,95 i 0,76 puta niže od onih protiv MCM-S. Dakle, to ukazuje na to da je osjetljivost na PBO i EO relativno slična između dva soja Aedes. Iako je PMD-R bio osjetljiviji od MCM-S, osjetljivost Aedes aegypti nije bila značajna. Nasuprot tome, dva soja Aedes uvelike su se razlikovala u svojoj osjetljivosti na permetrin aegypti (Tablica 4). PMD-R je pokazao značajnu otpornost na permetrin (LD50 vrijednost = 0,44 ng/mg kod žena) s višom LD50 vrijednošću od 3,70 u usporedbi s MCM-S (LD50 vrijednost = 0,44 ng/mg kod žena) ng/mg kod žena (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Iako je PMD-R mnogo manje osjetljiv na permetrin od MCM-S, njegova osjetljivost na PBO i ulja C. verum, A. galanga i C. rotundus je nešto veća od MCM-S.
Kao što je uočeno u biološkom testu kombinacije EO i permetrina na odrasloj populaciji, binarne smjese permetrina i EO (LD25) pokazale su ili sinergiju (vrijednost SR > 1,05) ili nikakav učinak (vrijednost SR = 1 ± 0,05). Složeni učinci smjese EO i permetrina na odrasle jedinke eksperimentalnih albino komarca. Sojevi Aedes aegypti MCM-S i PMD-R prikazani su u Tablici 4 i Slici 3. Dodatak ulja C. verum neznatno smanjuje LD50 permetrina u odnosu na MCM-S i neznatno povećava LD50 u odnosu na PMD-R na 0,44–0,42 ng/mg kod žena, odnosno s 3,70 na 3,85 ng/mg kod žena. Nasuprot tome, dodatak ulja C. rotundus i A. galanga značajno je smanjio LD50 permetrina na MCM-S s 0,44 na 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) i na 0,11 (U = 0, Z) = -2,309, P = 0,029) ng/mg kod žena. Na temelju LD50 vrijednosti MCM-S, SR vrijednosti smjese EO-permetrina nakon dodavanja ulja C. rotundus i A. galanga bile su 6,28 odnosno 4,00. Sukladno tome, LD50 permetrina protiv PMD-R značajno se smanjio s 3,70 na 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) i na 0,003 dodatkom ulja C. rotundus i A. galanga (U = 0). , Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg ženki. SR vrijednost permetrina u kombinaciji s C. rotundus protiv PMD-R bila je 8,81, dok je SR vrijednost smjese galangala i permetrina bila 1233,33. U odnosu na MCM-S, LD50 vrijednost pozitivne kontrole PBO smanjila se s 0,44 na 0,26 ng/mg (ženke) i s 3,70 ng/mg (ženke) na 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) i PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Vrijednosti SR smješavine PBO-permetrin za sojeve MCM-S i PMD-R bile su 1,69 odnosno 5,69. Ovi rezultati pokazuju da ulja C. rotundus i A. galanga te PBO povećavaju toksičnost permetrina u većoj mjeri nego ulje C. verum za sojeve MCM-S i PMD-R.
Aktivnost u odraslim jedinkama (LD50) EO, PBO, permetrina (PE) i njihovih kombinacija protiv sojeva komaraca Aedes osjetljivih na piretroid (MCM-S) i rezistentnih (PMD-R) sojeva komaraca Aedes. Aedes aegypti
[45]. Sintetski piretroidi se koriste diljem svijeta za suzbijanje gotovo svih člankonožaca od poljoprivrednog i medicinskog značaja. Međutim, zbog štetnih posljedica upotrebe sintetičkih insekticida, posebno u smislu razvoja i široko rasprostranjene otpornosti komaraca, kao i utjecaja na dugoročno zdravlje i okoliš, sada postoji hitna potreba za smanjenjem upotrebe tradicionalnih sintetičkih insekticida i razvojem alternativa [35, 46, 47]. Osim zaštite okoliša i ljudskog zdravlja, prednosti botaničkih insekticida uključuju visoku selektivnost, globalnu dostupnost te jednostavnost proizvodnje i upotrebe, što ih čini privlačnijima za suzbijanje komaraca [32, 48, 49]. Ova studija, osim što je razjasnila kemijske karakteristike učinkovitih eteričnih ulja putem GC-MS analize, također je procijenila potentnost odraslih eteričnih ulja i njihovu sposobnost da pojačaju toksičnost sintetičkog permetrina aegypti u sojevima osjetljivim na piretroide (MCM-S) i rezistentnim sojevima (PMD-R).
GC-MS karakterizacija pokazala je da su cipern (14,04%), β-bisabolen (18,27%) i cinamaldehid (64,66%) glavne komponente ulja C. rotundus, A. galanga i C. verum. Ove kemikalije pokazale su različite biološke aktivnosti. Ahn i sur. [50] izvijestili su da 6-acetoksiciperen, izoliran iz rizoma C. rotundus, djeluje kao antitumorski spoj i može izazvati apoptozu ovisnu o kaspazama u stanicama raka jajnika. β-Bisabolen, ekstrahiran iz eteričnog ulja stabla smirne, pokazuje specifičnu citotoksičnost protiv stanica tumora dojke kod ljudi i miševa, kako in vitro tako i in vivo [51]. Izviješteno je da cinamaldehid, dobiven iz prirodnih ekstrakata ili sintetiziran u laboratoriju, ima insekticidno, antibakterijsko, antifungalno, protuupalno, imunomodulatorno, antikancerogeno i antiangiogeno djelovanje [52].
Rezultati biološkog testa aktivnosti kod odraslih jedinki ovisne o dozi pokazali su dobar potencijal testiranih EO i pokazali su da sojevi komaraca Aedes MCM-S i PMD-R imaju sličnu osjetljivost na EO i PBO. Aedes aegypti. Usporedba učinkovitosti EO i permetrina pokazala je da potonji ima jači alercidni učinak: vrijednosti LD50 iznose 0,44 i 3,70 ng/mg kod ženki za sojeve MCM-S i PMD-R. Ove nalaze potvrđuju mnoge studije koje pokazuju da su prirodni pesticidi, posebno proizvodi biljnog podrijetla, općenito manje učinkoviti od sintetičkih tvari [31, 34, 35, 53, 54]. To može biti zato što je prvi složena kombinacija aktivnih ili neaktivnih sastojaka, dok je drugi pročišćeni pojedinačni aktivni spoj. Međutim, raznolikost i složenost prirodnih aktivnih sastojaka s različitim mehanizmima djelovanja mogu pojačati biološku aktivnost ili ometati razvoj otpornosti u populacijama domaćina [55, 56, 57]. Mnogi istraživači izvijestili su o potencijalu protiv komaraca C. verum, A. galanga i C. rotundus te njihovih komponenti poput β-bisabolena, cinamaldehida i 1,8-cineola [22, 36, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64]. Međutim, pregled literature otkrio je da nije bilo prethodnih izvješća o njegovom sinergijskom učinku s permetrinom ili drugim sintetičkim insekticidima protiv komaraca Aedes. Aedes aegypti.
U ovoj studiji uočene su značajne razlike u osjetljivosti na permetrin između dva soja Aedes. Aedes aegypti. MCM-S je osjetljiv na permetrin, dok je PMD-R mnogo manje osjetljiv na njega, sa stopom otpornosti od 8,41. U usporedbi s osjetljivošću MCM-S, PMD-R je manje osjetljiv na permetrin, ali osjetljiviji na EO, što pruža osnovu za daljnja istraživanja usmjerena na povećanje učinkovitosti permetrina kombiniranjem s EO. Sinergistički biološki test na temelju kombinacije za učinke na odrasle sojeve pokazao je da binarne smjese EO i permetrina smanjuju ili povećavaju smrtnost odraslih sojeva Aedes. Aedes aegypti. Dodatak ulja C. verum neznatno je smanjio LD50 permetrina u odnosu na MCM-S, ali je neznatno povećao LD50 u odnosu na PMD-R s vrijednostima SR od 1,05 odnosno 0,96. To ukazuje na to da ulje C. verum nema sinergistički ili antagonistički učinak na permetrin kada se testira na MCM-S i PMD-R. Nasuprot tome, ulja C. rotundus i A. galanga pokazala su značajan sinergistički učinak značajnim smanjenjem LD50 vrijednosti permetrina na MCM-S ili PMD-R. Kada je permetrin kombiniran s EO C. rotundus i A. galanga, SR vrijednosti smjese EO-permetrin za MCM-S bile su 6,28 odnosno 4,00. Osim toga, kada je permetrin procijenjen u odnosu na PMD-R u kombinaciji s C. rotundus (SR = 8,81) ili A. galanga (SR = 1233,33), SR vrijednosti su se značajno povećale. Vrijedi napomenuti da su i C. rotundus i A. galanga značajno povećali toksičnost permetrina protiv PMD-R Ae. aegypti. Slično tome, utvrđeno je da PBO povećava toksičnost permetrina s SR vrijednostima od 1,69 odnosno 5,69 za sojeve MCM-S i PMD-R. Budući da su C. rotundus i A. galanga imali najviše vrijednosti SR, smatrani su najboljim sinergistima u pojačavanju toksičnosti permetrina na MCM-S i PMD-R.
Nekoliko prethodnih studija izvijestilo je o sinergističkom učinku kombinacija sintetičkih insekticida i biljnih ekstrakata protiv različitih vrsta komaraca. Larvicidni biološki test protiv Anopheles Stephensi koji su proučavali Kalayanasundaram i Das [65] pokazao je da je fention, organofosfat širokog spektra, povezan s Cleodendron inerme, Pedalium murax i Parthenium hysterophorus. Uočena je značajna sinergija između ekstrakata sa sinergističkim učinkom (SF) od 1,31, 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 i 2,23. U larvicidnom probiru 15 vrsta mangrova, utvrđeno je da je ekstrakt petrolejskog etera korijenja mangrove s nogu najučinkovitiji protiv Culex quinquefasciatus s LC50 vrijednošću od 25,7 mg/L [66]. Sinergijski učinak ovog ekstrakta i botaničkog insekticida piretruma također je zabilježen u smanjenju LC50 piretruma protiv ličinki C. quinquefasciatus s 0,132 mg/L na 0,107 mg/L, a u ovoj je studiji korišten i izračun SF od 1,23. 34,35,44]. Procijenjena je kombinirana učinkovitost ekstrakta korijena Solanum citron i nekoliko sintetičkih insekticida (npr. fentiona, cipermetrina (sintetskog piretroida) i timetfosa (organofosfornog larvicida)) protiv komaraca Anopheles. Stephensi [54] i C. quinquefasciatus [34]. Kombinirana upotreba cipermetrina i ekstrakta petrolejskog etera žutog ploda pokazala je sinergijski učinak na cipermetrin u svim omjerima. Najučinkovitiji omjer bio je binarna kombinacija 1:1 s vrijednostima LC50 i SF od 0,0054 ppm i 6,83 u odnosu na An. Stephen West [54]. Dok je binarna smjesa S. xanthocarpum i temefosa u omjeru 1:1 bila antagonistička (SF = 0,6406), kombinacija S. xanthocarpum-fention (1:1) pokazala je sinergističku aktivnost protiv C. quinquefasciatus s SF od 1,3125 [34]]. Tong i Blomquist [35] proučavali su učinke biljnog etilen oksida na toksičnost karbarila (karbamata širokog spektra) i permetrina na komarce Aedes. Aedes aegypti. Rezultati su pokazali da etilen oksid iz agara, crnog papra, borovice, smilja, sandalovine i sezama povećava toksičnost karbarila na komarce Aedes. Vrijednosti SR za ličinke Aedypti variraju od 1,0 do 7,0. Nasuprot tome, nijedan od EO nije bio toksičan za odrasle komarce Aedes. U ovoj fazi nisu zabilježeni sinergijski učinci za kombinaciju Aedes aegypti i EO-karbarila. PBO je korišten kao pozitivna kontrola za pojačavanje toksičnosti karbarila protiv komaraca Aedes. Vrijednosti SR ličinki i odraslih Aedes aegypti su 4,9-9,5 odnosno 2,3. Samo su binarne smjese permetrina i EO ili PBO testirane na larvicidno djelovanje. Smjesa EO-permetrina imala je antagonistički učinak, dok je smjesa PBO-permetrina imala sinergijski učinak protiv komaraca Aedes. Ličinke Aedes aegypti. Međutim, eksperimenti s odgovorom na dozu i evaluacija SR za smjese PBO-permetrina još nisu provedeni. Iako je postignuto malo rezultata u vezi s sinergijskim učincima fitosintetskih kombinacija protiv vektora komaraca, ovi podaci podržavaju postojeće rezultate, koji otvaraju mogućnost dodavanja sinergista ne samo radi smanjenja primijenjene doze, već i radi povećanja učinka ubijanja. Učinkovitost insekata. Osim toga, rezultati ove studije prvi su put pokazali da ulja C. rotundus i A. galanga sinergijski pokazuju značajno veću učinkovitost protiv sojeva komaraca Aedes osjetljivih na piretroid i otpornih na piretroid u usporedbi s PBO kada se kombiniraju s toksičnošću permetrina. Aedes aegypti. Međutim, neočekivani rezultati sinergističke analize pokazali su da ulje C. verum ima najveću antiadultnu aktivnost protiv oba soja Aedes. Iznenađujuće, toksični učinak permetrina na Aedes aegypti bio je nezadovoljavajući. Varijacije u toksičnim učincima i sinergijskim učincima mogu biti djelomično posljedica izloženosti različitim vrstama i razinama bioaktivnih komponenti u tim uljima.
Unatoč naporima da se shvati kako poboljšati učinkovitost, sinergijski mehanizmi ostaju nejasni. Mogući razlozi za različitu učinkovitost i sinergijski potencijal mogu uključivati razlike u kemijskom sastavu testiranih proizvoda i razlike u osjetljivosti komaraca povezane sa statusom i razvojem otpornosti. Postoje razlike između glavnih i sporednih komponenti etilen oksida testiranih u ovoj studiji, a neki od ovih spojeva pokazali su da imaju repelentne i toksične učinke protiv raznih štetnika i vektora bolesti [61,62,64,67,68]. Međutim, glavni spojevi karakterizirani u uljima C. rotundus, A. galanga i C. verum, poput ciperna, β-bisabolena i cinamaldehida, nisu testirani u ovom radu na njihovo djelovanje protiv odraslih i sinergističko djelovanje protiv Ae, respektivno, Aedes aegypti. Stoga su potrebna buduća istraživanja kako bi se izolirali aktivni sastojci prisutni u svakom eteričnom ulju i razjasnila njihova insekticidna učinkovitost i sinergijske interakcije protiv ovog vektora komaraca. Općenito, insekticidna aktivnost ovisi o djelovanju i reakciji između otrova i tkiva insekata, što se može pojednostaviti i podijeliti u tri faze: prodiranje u kožu tijela insekata i membrane ciljnih organa, aktivacija (= interakcija s metom) i detoksikacija otrovnih tvari [57, 69]. Stoga, sinergizam insekticida koji rezultira povećanom učinkovitošću kombinacija otrova zahtijeva barem jednu od ovih kategorija, kao što su povećana penetracija, veća aktivacija akumuliranih spojeva ili manje smanjena detoksikacija aktivnog sastojka pesticida. Na primjer, energetska tolerancija odgađa prodiranje kutikule kroz zadebljanu kutikulu i biokemijska otpornost, kao što je poboljšani metabolizam insekticida uočen kod nekih otpornih sojeva insekata [70, 71]. Značajna učinkovitost etilen oksida (EO) u povećanju toksičnosti permetrina, posebno protiv PMD-R, može ukazivati na rješenje problema otpornosti na insekticide interakcijom s mehanizmima otpornosti [57, 69, 70, 71]. Tong i Blomquist [35] podržali su rezultate ove studije pokazujući sinergističku interakciju između EO i sintetskih pesticida. aegypti, postoje dokazi o inhibitornoj aktivnosti protiv detoksikacijskih enzima, uključujući citokrom P450 monooksigenaze i karboksilesteraze, koji su usko povezani s razvojem otpornosti na tradicionalne pesticide. PBO se ne smatra samo metaboličkim inhibitorom citokrom P450 monooksigenaze, već i poboljšava prodiranje insekticida, što je dokazano njegovom upotrebom kao pozitivne kontrole u sinergističkim studijama [35, 72]. Zanimljivo je da je 1,8-cineol, jedna od važnih komponenti koje se nalaze u ulju galangala, poznat po svojim toksičnim učincima na vrste insekata [22, 63, 73] i da ima sinergističke učinke u nekoliko područja istraživanja biološke aktivnosti [74]. ,75,76,77]. Osim toga, 1,8-cineol u kombinaciji s raznim lijekovima, uključujući kurkumin [78], 5-fluorouracil [79], mefenaminsku kiselinu [80] i zidovudin [81], također ima učinak poticanja prodiranja in vitro. Dakle, moguća uloga 1,8-cineola u sinergističkom insekticidnom djelovanju nije samo kao aktivni sastojak, već i kao pojačivač penetracije. Zbog većeg sinergizma s permetrinom, posebno protiv PMD-R, sinergijski učinci ulja galangala i ulja trihozantesa uočeni u ovoj studiji mogu biti rezultat interakcija s mehanizmima otpornosti, tj. povećane propusnosti za klor. Piretroidi povećavaju aktivaciju akumuliranih spojeva i inhibiraju detoksikacijske enzime poput citokrom P450 monooksigenaza i karboksilesteraza. Međutim, ovi aspekti zahtijevaju daljnja istraživanja kako bi se razjasnila specifična uloga EO i njegovih izoliranih spojeva (samostalno ili u kombinaciji) u sinergijskim mehanizmima.
Godine 1977. zabilježene su sve veće razine otpornosti na permetrin u glavnim populacijama vektora u Tajlandu, a tijekom sljedećih desetljeća upotreba permetrina uglavnom je zamijenjena drugim piretroidnim kemikalijama, posebno onima koje je zamijenio deltametrin [82]. Međutim, otpornost vektora na deltametrin i druge klase insekticida izuzetno je česta u cijeloj zemlji zbog prekomjerne i uporne upotrebe [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Kako bi se suzbio ovaj problem, preporučuje se rotacija ili ponovna upotreba odbačenih pesticida koji su prethodno bili učinkoviti i manje toksični za sisavce, poput permetrina. Iako je upotreba permetrina smanjena u nedavnim nacionalnim vladinim programima suzbijanja komaraca, otpornost na permetrin još uvijek se može pronaći u populacijama komaraca. To može biti posljedica izloženosti komaraca komercijalnim proizvodima za suzbijanje štetočina u kućanstvu, koji se uglavnom sastoje od permetrina i drugih piretroida [14, 17]. Stoga, uspješna prenamjena permetrina zahtijeva razvoj i provedbu strategija za smanjenje otpornosti vektora. Iako nijedno od eteričnih ulja testiranih pojedinačno u ovoj studiji nije bilo toliko učinkovito kao permetrin, zajednički rad s permetrinom rezultirao je impresivnim sinergijskim učincima. Ovo je obećavajući pokazatelj da interakcija EO s mehanizmima otpornosti rezultira time da je kombinacija permetrina s EO učinkovitija od insekticida ili EO samostalno, posebno protiv PMD-R Ae. Aedes aegypti. Prednosti sinergističkih smjesa u povećanju učinkovitosti, unatoč korištenju nižih doza za suzbijanje vektora, mogu dovesti do poboljšanog upravljanja otpornošću i smanjenja troškova [33, 87]. Iz ovih rezultata, zadovoljstvo je primijetiti da su EO A. galanga i C. rotundus bili značajno učinkovitiji od PBO u sinergističkom djelovanju toksičnosti permetrina i kod sojeva MCM-S i PMD-R te su potencijalna alternativa tradicionalnim ergogenim pomagalima.
Odabrani EO imali su značajne sinergijske učinke u povećanju toksičnosti za odrasle protiv PMD-R Ae. aegypti, posebno ulje galangala, koje ima SR vrijednost do 1233,33, što ukazuje na to da EO ima širok potencijal kao sinergist u povećanju učinkovitosti permetrina. To bi moglo potaknuti upotrebu novog aktivnog prirodnog proizvoda, što bi zajedno moglo povećati upotrebu visoko učinkovitih proizvoda za suzbijanje komaraca. Također otkriva potencijal etilen oksida kao alternativnog sinergista za učinkovito poboljšanje starijih ili tradicionalnih insekticida kako bi se riješili postojeći problemi otpornosti u populacijama komaraca. Korištenje lako dostupnih biljaka u programima suzbijanja komaraca ne samo da smanjuje ovisnost o uvoznim i skupim materijalima, već i potiče lokalne napore za jačanje sustava javnog zdravstva.
Ovi rezultati jasno pokazuju značajan sinergijski učinak koji proizvodi kombinacija etilen oksida i permetrina. Rezultati ističu potencijal etilen oksida kao biljnog sinergista u suzbijanju komaraca, povećavajući učinkovitost permetrina protiv komaraca, posebno u otpornim populacijama. Budući razvoj i istraživanja zahtijevat će sinergijsku bioanalizu ulja galangala i alpinije te njihovih izoliranih spojeva, kombinacije insekticida prirodnog ili sintetskog podrijetla protiv više vrsta i stadija komaraca te testiranje toksičnosti protiv organizama koji nisu ciljna skupina. Praktična primjena etilen oksida kao održivog alternativnog sinergista.
Svjetska zdravstvena organizacija. Globalna strategija za prevenciju i kontrolu denge 2012.–2020. Ženeva: Svjetska zdravstvena organizacija, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., et al. Zika virus: povijest, pojava, biologija i mogućnosti kontrole. Antivirusna istraživanja. 2016;130:69-80.
Svjetska zdravstvena organizacija. Informativni list o dengi. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Datum pristupa: 20. siječnja 2017.
Ministarstvo javnog zdravstva. Trenutno stanje slučajeva denga groznice i hemoragijske denga groznice u Tajlandu. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Datum pristupa: 6. siječnja 2017.
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 godina prevencije denge i kontrole vektora u Singapuru. Iznenadna zarazna bolest. 2006.;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Prepoznati izazove i predložiti rješenja za kontrolu virusnih vektora Aedes aegypti. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Centri za kontrolu i prevenciju bolesti. Dengue groznica, entomologija i ekologija. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Datum pristupa: 6. siječnja 2017.
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Usporedba larvicidne aktivnosti lišća, kore, stabljika i korijenja Jatropa curcas (Euphorbiaceae) protiv vektora malarije Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Karakteristike staništa ličinki Anophelesa u područjima malarije u okviru programa iskorjenjivanja malarije u jugoistočnom Iranu. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Dodatak 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Pregled pristupa kontroli vektora, sprječavanju i kontroli epidemija virusa Zapadnog Nila i izazovi s kojima se suočava Europa. Vektor parazita. 2014.;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Selekcija i molekularni mehanizmi otpornosti na cipermetrin u crvenih gusjenica (Amsacta albistriga Walker). Biokemijska fiziologija štetnika. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Laboratorijska studija otpornosti na permetrin i unakrsne otpornosti Culex quinquefasciatus na druge insekticide. Istraživački centar Palastor. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Kemija pesticida: Ljudska dobrobit i okoliš, svezak 3: Mehanizam djelovanja, metabolizam i toksikologija. New York: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Pregled otpornosti na insekticide i izbjegavanja ponašanja vektora ljudskih bolesti u Tajlandu. Vektor parazita. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Trenutni obrasci otpornosti na insekticide među vektorima komaraca u Tajlandu. Jugoistočna Azija J Trop Med Javno zdravstvo. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Status malarije u Tajlandu. Jugoistočna Azija J Trop Med Javno zdravstvo. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Vremenska učestalost mutacija otpornosti na obaranje F1534C i V1016G kod komaraca Aedes aegypti u Chiang Maiju, Tajland, i utjecaj mutacija na učinkovitost termalnih sprejeva za maglu koji sadrže piretroide. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Otpornost na insekticide u glavnim vektorima denge Aedes albopictus i Aedes aegypti. Biokemijska fiziologija štetnika. 2012;104:126-31.
Vrijeme objave: 08.07.2024.