DELLA proteini su konzervirani glavniregulatori rastakoji igraju središnju ulogu u kontroli razvoja biljaka kao odgovor na unutarnje i okolišne znakove.PE djeluje kao transkripcijski regulator i regrutira se za ciljane promotore vezanjem na transkripcijske faktore (TF) i histon H2A putem svoje GRAS domene. Nedavne studije pokazale su da je stabilnost PE posttranslacijski regulirana putem dva mehanizma: poliubikvitinacije inducirane fitohormonom giberelinom, što dovodi do njegove brze razgradnje, i konjugacije malih ubikvitinu sličnih modifikatora (SUMO) kako bi se povećala njegova akumulacija. Osim toga, aktivnost PE dinamički je regulirana s dvije različite glikozilacije: interakcija PE-TF pojačana je O-fukozilacijom, ali inhibirana O-vezanom modifikacijom N-acetilglukozamina (O-GlcNAc). Međutim, uloga PE fosforilacije ostaje nejasna, budući da su prethodne studije pokazale oprečne rezultate, od onih koji pokazuju da fosforilacija potiče ili smanjuje razgradnju PE do drugih koji pokazuju da fosforilacija ne utječe na njezinu stabilnost. Ovdje identificiramo mjesta fosforilacije u REPRESOR-u.ga1-3(RGA, AtDELLA) pročišćeni iz Arabidopsis thaliana analizom masenom spektrometrijom i pokazuju da fosforilacija dva RGA peptida na PolyS i PolyS/T regijama potiče vezanje H2A i pojačava RGA aktivnost. Povezanost RGA s ciljnim promotorima. Značajno je da fosforilacija ne utječe na RGA-TF interakcije ili RGA stabilnost. Naša studija otkriva molekularni mehanizam kojim fosforilacija inducira DJAL aktivnost.
Kako bi se razjasnila uloga fosforilacije u regulaciji funkcije CYP2D6-a, ključno je identificirati mjesta fosforilacije CYP2D6-a in vivo i provesti funkcionalne analize u biljkama. Afinitetnim pročišćavanjem biljnih ekstrakata, a zatim MS/MS analizom, identificirali smo nekoliko fosfozita u RGA. U uvjetima nedostatka GA, fosforilacija RHA se povećava, ali fosforilacija ne utječe na njezinu stabilnost. Važno je da su co-IP i ChIP-qPCR testovi otkrili da fosforilacija u PolyS/T regiji RGA potiče njegovu interakciju s H2A i njegovo povezivanje s ciljnim promotorima, otkrivajući mehanizam kojim fosforilacija inducira funkciju RGA.
RGA se regrutira za ciljni kromatin interakcijom LHR1 poddomene s TF, a zatim se veže na H2A putem svoje PolyS/T regije i PFYRE poddomene, tvoreći H2A-RGA-TF kompleks za stabilizaciju RGA. Fosforilacija Pep 2 u PolyS/T regiji između Domaine of Excel i GRAS domene neidentificiranom kinazom pojačava vezanje RGA-H2A. Mutirani protein rgam2A ukida fosforilaciju RGA i usvaja drugačiju konformaciju proteina kako bi ometao vezanje H2A. To rezultira destabilizacijom prolaznih TF-rgam2A interakcija i disocijacijom rgam2A od ciljnog kromatina. Ova slika prikazuje samo RGA-posredovanu transkripcijsku represiju. Sličan obrazac mogao bi se opisati za RGA-posredovanu transkripcijsku aktivaciju, osim što bi H2A-RGA-TF kompleks promovirao transkripciju ciljnog gena, a defosforilacija rgam2A bi smanjila transkripciju. Slika je modificirana od Huang et al.21.
Svi kvantitativni podaci statistički su analizirani pomoću Excela, a značajne razlike utvrđene su Studentovim t-testom. Nisu korištene statističke metode za preliminarno određivanje veličine uzorka. Nijedan podatak nije isključen iz analize; eksperiment nije bio randomiziran; istraživači nisu bili slijepi za distribuciju podataka tijekom eksperimenta i evaluaciju rezultata. Veličina uzorka naznačena je u legendi slike i izvornoj datoteci.
Za više informacija o dizajnu studije pogledajte sažetak izvješća o prirodnom portfelju povezan s ovim člankom.
Podaci proteomike masene spektrometrije doprinijeli su konzorciju ProteomeXchange putem partnerskog repozitorija PRIDE66 s identifikatorom skupa podataka PXD046004. Svi ostali podaci dobiveni tijekom ove studije prikazani su u Dodatnim informacijama, Datotekama dodatnih podataka i Datotekama sirovih podataka. Izvorni podaci navedeni su za ovaj članak.
Vrijeme objave: 08.11.2024.